酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay) 是ELISA的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。ELSIA試驗所用試劑器材:
一、試劑:
1、 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):
NaCO31.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸餾水至1000ml
2、洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M KH2PO40.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05%0.5ml加蒸餾水至1000ml
3、 稀釋液:牛血清白蛋白(BSA)0.1克 加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
4、終止液(2MH2SO4):蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
5、底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml 0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml 加蒸餾水50ml。
6、TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml底物緩沖液(PH5.5)10ml0.75%H2O232μl
7、ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物緩沖液(PH5.5)1ml 3%H2O2 2μl
8、抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。
9、正常人血清和陽性對照血清。
二. 器材:
1、聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標(biāo)板)40孔或96孔,ELISA檢測儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。
2、 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
3、4℃冰箱,37℃孵育箱。