多克隆抗體的第一步和單克隆抗體一樣,都是將免疫原注射到宿主體內(nèi)產(chǎn)生免疫反應(yīng),激活了多種B細(xì)胞。不同的是免疫過后,多克隆抗體就直接從免疫宿主的血清中分離出來,或接著進(jìn)行純化,沒有與骨髓瘤細(xì)胞融合的過程。一旦宿主動(dòng)物死亡,需要免疫新的動(dòng)物,這時(shí)血清中的抗體就會(huì)有所不同。雖然多抗每批次有輕微差別,但是因?yàn)樗R(shí)別的表位多,這個(gè)差別影響并不算太大,而單克隆抗體雖然價(jià)格偏高,可是特異性更強(qiáng)更穩(wěn)定。可以說單抗和多抗是各有各的優(yōu)點(diǎn)。
多克隆抗體更適用于:
1、檢測有高同源性的抗原的已知或未知同種型
2、檢測濃度較低的抗原
3、捕獲盡可能多的抗原 (例如 IP 或 ChiP)
4、檢測變性的蛋白
5、檢測可能發(fā)生了糖基化或形態(tài)變化的目標(biāo)蛋白
6、用多種檢測方法檢測一種原蛋白時(shí)
7、檢測 pH 和鹽度不同的溶液中的目標(biāo)蛋白
多克隆抗體不建議用于:
1、量化檢測,比如:流式。由于不同表位的結(jié)合導(dǎo)致信號被放大加強(qiáng),可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確
2、當(dāng)高同源性蛋白的交叉反應(yīng)會(huì)引起問題時(shí)