ELISA試劑盒成果解析方式
發(fā)布日期:2019-04-19 瀏覽次數(shù):760
這對于試驗室科研工作者來說,試驗細節(jié)使非常重要的。在ELISA試劑盒試驗中的各項操作細節(jié)有許多,如盡量少用排槍、勤換槍頭,加樣時由低濃度向高濃度加,因為這樣能夠削減跳孔的幾率。而整個試驗的后關(guān)鍵就是成果的處理辦法了,那么在今天就為您帶來的是ELISA試劑盒成果解析方式。
1、ELISA試驗中樣品都要做復孔或三孔,然后計算每個濃度規(guī)范品的均勻OD值,復孔的變異系數(shù)應該小于20%。
2、均勻OD值減去空白孔的OD值。
3、制造規(guī)范曲線。
以減去本底后的OD值為X軸,規(guī)范品的濃度為Y軸,利用作圖軟件得出一個適宜的計算辦法。主張運用適宜的軟件來作圖,比方CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出許多種辦法(比方直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中挑選一條zui適宜的方程。要想檢驗某條曲線是否與表中數(shù)據(jù)符合,能夠?qū)⒁?guī)范品的濃度作為未知數(shù),將對應的OD值帶入該方程,計算出規(guī)范品的濃度,得到的成果應該與實際濃度很接近(+/-10%)。挑選擬合度zui高的那條曲線。
假如出現(xiàn)規(guī)范曲線的線性欠好,或平行性欠好(雙孔對照孔的OD值差別很大),或出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象,可能引起的原因有酶標板孔間相互污染、洗板后未能趕快進行下一步操作、增加樣品或其它試劑時操作的辦法不對、孵育方位避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發(fā)、酶標板孔問參加的試劑量不同,相對應的解決辦法是加樣時請當心勿將液體濺人另一孔中,人工洗板時也請當心,勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時進行下一步操作、增加試劑時請懸空滴入,切記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi),汲取不同試劑瓶中的液體時就要更換一次槍頭、承認孵育環(huán)境不透光,蓋板膜將酶標板密封好、運用已校正過的微量加樣器,如將*次參加液體時槍頭上留有一滴的液體滴下,那么將以后槍頭上留有的液體也滴下,以確保參加液體體積的一致性。