人檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、化的抗C3抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
人檢測(cè)試劑盒儲(chǔ)存及有效期:
未開封的試劑盒:所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請(qǐng)注意,收到試劑盒后請(qǐng)盡快將TMB 洗滌液,終止液保存于4℃,其他試劑保存于-20℃。
使用后的試劑盒:剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存,開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。
人檢測(cè)試劑盒試劑配制:
1、 標(biāo)準(zhǔn)品
(1) 從試劑盒中取出一支標(biāo)準(zhǔn)品,于6000-10000rpm 離心30 秒。用1ml 樣本稀釋液溶解,并
用吸頭對(duì)準(zhǔn)凍存管底部反復(fù)吸打5 次以助溶解,充分混勻得到標(biāo)準(zhǔn)品S7,放置備用。
(2) 取7 個(gè)1.5 ml 離心管(S0-S6)依次排列,各加入250μl 樣本稀釋液。吸取250μl 標(biāo)準(zhǔn)品
S7 到*個(gè)離心管中(S6),輕輕吹打混勻。從S6 中吸取250μl 到第二個(gè)EP 管中(S5),
輕輕吹打混勻。以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋。S0 為樣本稀釋液。
2、 洗液工作液
濃洗滌液按1:25倍用去離子水進(jìn)行稀釋。例如用量筒量取240ml去離子水,倒入燒杯或其
他潔凈容器中,再量取10ml濃洗滌液,均勻加入,攪拌混勻,在臨用前配妥。濃洗滌液低溫保
存會(huì)有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
3、 標(biāo)記抗體工作液
標(biāo)記抗體液按1:100倍用標(biāo)記抗體稀釋液進(jìn)行稀釋。如10μl標(biāo)記抗體加
990μl標(biāo)記抗體稀釋液,輕輕混勻,在臨用*分鐘內(nèi)配妥。
4、 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素按1:100倍用辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液進(jìn)行稀釋。如
10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液,輕輕混勻,在臨用
*分鐘內(nèi)配妥。