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載脂蛋白ELISA檢測試劑盒操作流程
  • 發(fā)布日期:2021-02-08      瀏覽次數(shù):903
    • 載脂蛋白ELISA檢測試劑盒操作流程如下:

      1待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。

      2酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。

      3洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后,即甩去,之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

      4陰性對照孔每孔加入pbs 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。

      5酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。

      6洗板,同4。

      7每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

      8酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。

      9洗板,同4。

      10每孔加tmb顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

      11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)。

      12分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,終測得的od值為兩者之差w1-w2,以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

      13數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本s和陰性對照n的 od值后,計(jì)算s/n值。s/n***2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。

       

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