更新時(shí)間:2023-10-26
DH5α 感受態(tài)細(xì)胞100ul*20是采用大腸桿菌經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108個(gè)轉(zhuǎn)化子/μg質(zhì)粒DNA,-70℃保存3個(gè)月轉(zhuǎn)化效率可保持在90%以上。
DH5α 感受態(tài)細(xì)胞100ul*20操作方法(以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘,該過程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
5 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
DH5α 感受態(tài)細(xì)胞100ul*20注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時(shí)間過長,以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
以下是 DH5α 感受態(tài)細(xì)胞100ul*20的相關(guān)產(chǎn)品:
hospho-Ack1 磷酸化Ack1抗體
phospho-AMPK alpha-1 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體
phospho-AMPK beta 1 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體
phospho-ALK 磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體
phospho-ATM 磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體
phospho-ATP citrate lyase 磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體
phospho-ATR 磷酸化ATR抗體
AMN1 細(xì)胞核重定位及紡錘體檢查點(diǎn)蛋白AMN1抗體
ALG11 天連接糖基化11抗體
ASF1A 細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體
AGPHD1 氨基糖苷類磷酸結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
ASGPR1 唾液酸糖蛋白受體1抗體
ARSF 芳香基硫酸酯酶F抗體
AKAP5 A激酶錨定蛋白5抗體
ATXN3L 小腦脊髓共濟(jì)失調(diào)蛋白3抗體
ASTE1 ASTE1蛋白抗體
phospho-APG4B 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4B抗體
AFAP 微絲相關(guān)蛋白1抗體
ADORA1 腺苷A1A受體抗體
ARSB 芳基硫酸酯酶B抗體
ABAT γ氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抗體
細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體 ATF-1 ELISA Kit 轉(zhuǎn)錄因子抗體-1(ATF-1)ELISA試劑盒
氨基糖苷類磷酸結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 SOX5 ELISA Kit 轉(zhuǎn)錄因子SOX-5(SOX5)ELISA試劑盒
唾液酸糖蛋白受體1抗體 SOX4 ELISA Kit 轉(zhuǎn)錄因子SOX-4(SOX4)ELISA試劑盒
芳香基硫酸酯酶F抗體 AP-1 ELISA Kit 轉(zhuǎn)錄因子1(AP-1)ELISA試劑盒
A激酶錨定蛋白5抗體 TTR ELISA Kit 轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)ELISA試劑盒
小腦脊髓共濟(jì)失調(diào)蛋白3抗體 TGFBI/BIGH3 ELISA Kit 轉(zhuǎn)化生長因子-β誘導(dǎo)蛋白IG-H3(TGFBI/BIGH3)ELISA試劑盒
ASTE1蛋白抗體 TGFBR3 ELISA Kit 轉(zhuǎn)化生長因子β受體3(TGFBR3)ELISA試劑盒
磷酸化自噬相關(guān)蛋白4B抗體 TGF-βR2 ELISA Kit 轉(zhuǎn)化生長因子β受體2(TGF-βR2)ELISA試劑盒
微絲相關(guān)蛋白1抗體 TGFβR2 ELISA Kit 轉(zhuǎn)化生長因子β受體2(TGFβR2)ELISA試劑盒
腺苷A1A受體抗體 TGFBR1 ELISA Kit 轉(zhuǎn)化生長因子β受體1(TGFBR1)ELISA試劑盒
芳基硫酸酯酶B抗體 TGF-β3 ELISA Kit 轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGF-β3)ELISA試劑盒
γ氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抗體 TGFβ2 ELISA Kit 轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒
共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1抗體 TGF-β1 ELISA Kit 轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒
腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶 TGF-α ELISA Kit 轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒
DH5α 感受態(tài)細(xì)胞100ul*20芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體 TGM2 ELISA Kit 轉(zhuǎn)酶2C多肽(TGM2)ELISA試劑盒
AlkB同源蛋白8抗體 MHCⅢ/HLA-Ⅲ ELISA Kit 主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA試劑盒
ABI基因家族成員3結(jié)合蛋白抗體 MHCⅡ/HLA-Ⅱ ELISA Kit 主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)ELISA試劑盒
Rho GTP酶激活蛋白20抗體 MHCⅠ/HLAⅠ ELISA Kit 主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA試劑盒