更新時(shí)間:2023-10-26
Y187 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10是采用大腸桿菌經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108個(gè)轉(zhuǎn)化子/μg質(zhì)粒DNA,-70℃保存3個(gè)月轉(zhuǎn)化效率可保持在90%以上。
Y187 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10操作方法(以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
Y187 感受態(tài)細(xì)胞100ul*102 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘,該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無(wú)菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
Y187 感受態(tài)細(xì)胞100ul*105 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過(guò)離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品:
SE 人金葡菌腸毒素 規(guī)格: 48T/96T
ADAM8 人解整合素樣金屬蛋白酶8 規(guī)格: 48T/96T
UU-Ab 人解脲脲原體抗體 規(guī)格: 48T/96T
CNTF 人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 規(guī)格: 48T/96T
TB-Ab IgG 人結(jié)核菌桿抗體IgG 規(guī)格: 48T/96T
Hpt/HP 人結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白 規(guī)格: 48T/96T
CTGF 人結(jié)締組織生長(zhǎng)因子 規(guī)格: 48T/96T
CTAPⅢ 人結(jié)締組織活化肽Ⅲ 規(guī)格: 48T/96T
Des 人結(jié)蛋白 規(guī)格: 48T/96T
CCA 人結(jié)腸癌抗原 規(guī)格: 48T/96T
Cav-1 人窖蛋白Caveolin1 規(guī)格: 48T/96T
KGF 人角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子 規(guī)格: 48T/96T
KAF 人角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子 規(guī)格: 48T/96T
GDNF 人膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 規(guī)格: 48T/96T
Collectin 人膠原凝集素 規(guī)格: 48T/96T
Collagenase II 人膠原酶II 規(guī)格: 48T/96T
Collagenase I 人膠原酶I 規(guī)格: 48T/96T
HCBⅡ 人膠原蛋白Ⅱ 規(guī)格: 48T/96T
PYD 人膠原吡啶交聯(lián) 規(guī)格: 48T/96T
PCP 人膠原C端肽酶 規(guī)格: 48T/96T
DAF 人降解加速因子 規(guī)格: 48T/96T
PCT 人降鈣素原 規(guī)格: 48T/96T
CGRP 人降鈣素基因相關(guān)肽 規(guī)格: 48T/96T
CT 人降鈣素 規(guī)格: 48T/96T
BFP 人堿性胎兒蛋白 規(guī)格: 48T/96T
ALP 人堿性磷酸酶 規(guī)格: 48T/96T
bFGF-9 人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9 規(guī)格: 48T/96T
bFGF-6 人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6 規(guī)格: 48T/96T
bFGF-4 人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4 規(guī)格: 48T/96T
bFGF 人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 規(guī)格: 48T/96T
Cx 人間隙連接蛋白 規(guī)格: 48T/96T
ALK 人間變性淋巴瘤激酶 規(guī)格: 48T/96T
TAb 人甲狀腺素抗體 規(guī)格: 48T/96T
T4 人甲狀腺素 規(guī)格: 48T/96T
TG 人甲狀腺球蛋白 規(guī)格: 48T/96T
TAb 人甲狀腺抗體 規(guī)格: 48T/96T
TBG 人甲狀腺結(jié)合球蛋白 規(guī)格: 48T/96T
TPO 人甲狀腺過(guò)氧化物酶 規(guī)格: 48T/96T
Y187 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10 THAA 人甲狀腺非肽激素抗體 規(guī)格: 48T/96T
TSI 人甲狀腺刺激免疫球蛋白 規(guī)格: 48T/96T
PTHrP 人甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白 規(guī)格: 4