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BM 無(wú)縫克隆試劑盒

更新時(shí)間:2023-11-10

簡(jiǎn)要描述:

BM 無(wú)縫克隆試劑盒利用痘苗病毒的拓?fù)洚悩?gòu)酶I(Topoisomerase I)的切割再連接的特點(diǎn)將PCR產(chǎn)物定向克隆到線(xiàn)性化的pBM28載體中。

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公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

商品屬性

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

P-PR1218

BM 無(wú)縫克隆試劑盒

20

P-PR1218

BM 無(wú)縫克隆試劑盒

20 ×3

保存條件:-20℃保存。
產(chǎn)品介紹:
利用痘苗病毒的拓?fù)洚悩?gòu)酶I(Topoisomerase I)的切割再連接的特點(diǎn)將PCR產(chǎn)物定向克隆到線(xiàn)性化的pBM28載體中。適用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5 等高保真DNA聚合酶擴(kuò)增的平末端PCR產(chǎn)物。pBM28 載體類(lèi)似于公司的pENTR/D-TOPO入門(mén)載體, 具有attL1 和attL2,為gateway系統(tǒng)中的入門(mén)載體。引物M13F(-21)和M13R可用于菌落PCR和測(cè)序鑒定。
產(chǎn)品特點(diǎn):
(1)連接反應(yīng)僅需 5 分鐘。
(2)只適合平末端 PCR 產(chǎn)物的快速、高效、定向克隆。
(3)載體采用了新的制備工藝,零背景,無(wú)需藍(lán)白斑篩選。
(4)與pBM27載體相比,pBM28載體無(wú)標(biāo)簽序列。
(5)載體為壯觀(guān)霉su抗性。
注意事項(xiàng):
(1)引物要求:PCR 引物5’端不能進(jìn)行磷酸化修飾,普通商業(yè)化引物即可。上游引物的5’ 端添加CACC 四個(gè)堿基(CACC 為真核表達(dá)所必需的Kozak 序列)。
(2)DNA 聚合酶:選用Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和Xerox 等高保真DNA 聚合酶用于PCR 擴(kuò)增。
(3)連接時(shí)間:5-15 分鐘,一般為 15 分鐘。
(4)連接溫度:室溫 (22℃-37℃),可使用PCR儀控溫。反應(yīng)溫度為25℃。若片段有高GC等復(fù)雜結(jié)構(gòu),可在37℃反應(yīng)。
(5)產(chǎn)物要求:為保證PCR產(chǎn)物完整,建議72℃后延伸5-10分鐘。連接前使用瓊脂糖凝

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