更新時(shí)間:2023-10-26
K599 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*50是采用大腸桿菌經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108個(gè)轉(zhuǎn)化子/μg質(zhì)粒DNA,-70℃保存3個(gè)月轉(zhuǎn)化效率可保持在90%以上。
K599 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*50以下是的訂購(gòu)信息儲(chǔ)存條件:-70℃凍存
操作方法:
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。
2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉(zhuǎn)化效率較高,*次使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量),用手管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 加入700 μl無(wú)抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。
K599 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*504. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
注意事項(xiàng)
1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
K599 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*503. 平板上陽(yáng)性克隆密度過(guò)大時(shí),由于營(yíng)養(yǎng)不足,陽(yáng)性克隆生長(zhǎng)變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
4. 濃度不應(yīng)高于25 μg/ml,過(guò)高的濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng),會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率時(shí)所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
5. 培養(yǎng)基中加入的目的是防止雜菌生長(zhǎng)、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質(zhì)粒篩選抗生素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但Ti質(zhì)粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮這些抗生素,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略)。
1,3-βD glucosidase 雞1,3-βD葡葡糖苷酶 規(guī)格: 48T/96T
Aflatoxin 黃 規(guī)格: 48T/96T
SJA 槐凝集素 規(guī)格: 48T/96T
PNA 花生凝集素 規(guī)格: 48T/96T
TRAIL-R3 猴子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3 規(guī)格: 48T/96T
AChRab 猴子乙酰受體抗體 規(guī)格: 48T/96T
PF-4/CXCL4 猴子血小板因子4 規(guī)格: 48T/96T
VEGFR-3 猴子血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-3 規(guī)格: 48T/96T
ADM 猴子腎上腺髓質(zhì)素 規(guī)格: 48T/96T
GFAP 猴子神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白 規(guī)格: 48T/96T
HSP gp96 猴子熱休克蛋白糖蛋白96 規(guī)格: 48T/96T
BNP 猴子腦鈉素/腦鈉尿肽 規(guī)格: 48T/96T
ET-1 猴子內(nèi)皮素1 規(guī)格: 48T/96T
ET 猴子內(nèi)毒素 規(guī)格: 48T/96T
MIF 猴子巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子 規(guī)格: 48T/96T
MIP-1α/CCL3 猴子巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α 規(guī)格: 48T/96T
Collagenase I 猴子膠原酶I 規(guī)格: 48T/96T
MMP11 猴子基質(zhì)金屬蛋白酶11 規(guī)格: 48T/96T
FSH 猴子促卵泡素 規(guī)格: 48T/96T
LTC4 猴子白三烯C4 規(guī)格: 48T/96T
IL-2R 猴子白介素2受體 規(guī)格: 48T/96T
IL-1 猴子白介素1 規(guī)格: 48T/96T
α1-MG 猴子α1微球蛋白 規(guī)格: 48T/96T
TNF-α 猴腫瘤壞死因子α 規(guī)格: 48T/96T
apo-B100 猴載脂蛋白B100 規(guī)格: 48T/96T
apo-A1 猴載脂蛋白A1 規(guī)格: 48T/96T
INS 猴胰島素 規(guī)格: 48T/96T
sVCAM-1 猴可溶性血管細(xì)胞粘附分子1 規(guī)格: 48T/96T
sICAM-1 猴可溶性細(xì)胞間粘附分子1 規(guī)格: 48T/96T
K599 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*50 LMA 猴抗肝細(xì)胞膜抗體 規(guī)格: 48T/96T
hs-CRP 猴超敏C反應(yīng)蛋白 規(guī)格: 48T/96T
IFN-γ 猴γ 干擾素 規(guī)格: 48T/96T
IFN-α 猴α干擾素 規(guī)格: 48T/96T
E-Selectin/CD62E 猴E選擇素 規(guī)格: 48T/96T