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腸道病毒組PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2023-11-06

簡(jiǎn)要描述:

腸道病毒組PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品, 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),具有廣泛的用途。

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腸道病毒組PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、腸道病毒組PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。

樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、腸道病毒組PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
    1.特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
    2.   重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
    3.   靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
    4.   實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
    5.   優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

    6.   優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。

反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

酸性核糖體磷蛋白P2抗體 英文縮寫: RPLP2

腫瘤相關(guān)表面抗原RCAS1抗體 英文縮寫: RCAS1

心肌蘭尼堿受體抗體(腦肌蘭尼堿受體) 英文縮寫: Ryanodine Receptor

RASSF5抗體 英文縮寫: RASSF5

環(huán)指蛋白93抗體 英文縮寫: RNF93

環(huán)指蛋白111抗體 英文縮寫: RNF111

環(huán)指蛋白121抗體 英文縮寫: RNF121

環(huán)指蛋白169抗體 英文縮寫: RNF169

環(huán)指蛋白113A抗體 英文縮寫: RNF113A

環(huán)指蛋白43抗體 英文縮寫: RNF43

腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記蛋白2抗體 英文縮寫: RASD2

環(huán)指蛋白14抗體 英文縮寫: RNF14

RAS相關(guān)GTP結(jié)合蛋白A抗體 英文縮寫: RRAGA

激酶1受體相互作用蛋白抗體 英文縮寫: RIPK-1

CASP2凋亡相關(guān)蛋白抗體 英文縮寫: RAIDD

DNA修復(fù)和重組蛋白R(shí)AD54B抗體 英文縮寫: RAD54B

畸胎瘤癌基因RAS相關(guān)病毒抗體 英文縮寫: RRAS2

Ras-GTP酶激活蛋白3抗體 英文縮寫: RASA3

神經(jīng)內(nèi)分泌特異性蛋白抗體 英文縮寫: Reticulon 1

脫氫酶11/丙型肝炎病毒核心蛋白抗體 英文縮寫: RDH11

腸道病毒組PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)維甲酸相關(guān)孤兒受體β抗體 英文縮寫: ROR beta

G蛋白GTP-GDP解離刺激因子1抗體 英文縮寫: RAP1GDS1

ras癌基因家族Rab3A--Rab3D抗體 英文縮寫: Rab3A+Rab3B+Rab3C+Rab3D

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