更新時間:2023-10-26
MSU440 電感受態(tài)細胞50ul*10是采用大腸桿菌經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,可用于DNA 的化學轉化。使用pUC19 質粒檢測,轉化效率可達108個轉化子/μg質粒DNA,-70℃保存3個月轉化效率可保持在90%以上。
MSU440 電感受態(tài)細胞50ul*10操作方法(以下操作均按無菌條件的標準進行)
1 取感受態(tài)細胞置于冰浴中,如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中,置于冰浴中。
● 一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實際情況分裝使用。應注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。
以下實驗以100 μl感受態(tài)細胞為例。
2 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細胞能夠被1 ng 超螺旋質粒DNA 所飽和),輕輕旋轉離心管以混勻內容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
MSU440 電感受態(tài)細胞50ul*103 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉移到冰浴中,使細胞冷卻2-3 分鐘,該過程不要搖動離心管。
4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(160-220 轉/分鐘),目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,使菌體復蘇。
MSU440 電感受態(tài)細胞50ul*105 將離心管內容物混勻,吸取100 μl 已轉化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時。
● 涂布用量可根據(jù)具體實驗來調整。如轉化的DNA 總量較多,可取更少量轉化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉化產(chǎn)物涂布平板。如果預計的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項
1. 感受態(tài)細胞應保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時間過長,以避免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2. 進行轉化操作時,應根據(jù)相應溫度及無菌條件的要求進行。
3 為防止轉化實驗不成功,可以保留部分連接反應液,以重新轉化,將損失降到低。
以下是的相關產(chǎn)品:
FE 大鼠鐵蛋白 規(guī)格: 48T/96T
GP-MM 大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM 規(guī)格: 48T/96T
GP-II 大鼠糖原磷酸化酶同工酶II 規(guī)格: 48T/96T
GP-BB 大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB 規(guī)格: 48T/96T
GSK 大鼠糖原合成酶激酶 規(guī)格: 48T/96T
CDT 大鼠糖缺失性轉鐵蛋白 規(guī)格: 48T/96T
GR 大鼠糖皮質類固醇受體 規(guī)格: 48T/96T
GHbA1c 大鼠糖化血紅蛋白A1c 規(guī)格: 48T/96T
gp130 大鼠糖蛋白130 規(guī)格: 48T/96T
CA-2 大鼠碳酸酐酶2 規(guī)格: 48T/96T
CA 大鼠碳酸酐酶 規(guī)格: 48T/96T
PLGF 大鼠胎盤生長因子 規(guī)格: 48T/96T
TREM-1 大鼠髓系細胞觸發(fā)受體-1 規(guī)格: 48T/96T
MBP 大鼠髓磷脂堿性蛋白 規(guī)格: 48T/96T
大鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質抗體IgG 大鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質抗體IgG 規(guī)格: 48T/96T
MPO 大鼠髓過氧化物酶 規(guī)格: 48T/96T
aFGF-1 大鼠酸性成纖維細胞生長因子1 規(guī)格: 48T/96T
AQP-5 大鼠水通道蛋白5 規(guī)格: 48T/96T
AQP-4 大鼠水通道蛋白4 規(guī)格: 48T/96T
AQP-3 大鼠水通道蛋白3 規(guī)格: 48T/96T
AQP-2 大鼠水通道蛋白2 規(guī)格: 48T/96T
AQP-1 大鼠水通道蛋白1 規(guī)格: 48T/96T
AQP-0 大鼠水通道蛋白0 規(guī)格: 48T/96T
DHT 大鼠雙氫睪酮 規(guī)格: 48T/96T
ECP 大鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白 規(guī)格: 48T/96T
ECF 大鼠嗜酸粒細胞趨化因子 規(guī)格: 48T/96T
CCL11 大鼠嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin 1 規(guī)格: 48T/96T
RBP-4 大鼠結合蛋白4 規(guī)格: 48T/96T
RBP 大鼠結合蛋白 規(guī)格: 48T/96T
MSU440 電感受態(tài)細胞50ul*10 GH 大鼠生長因子 規(guī)格: 48T/96T
SS 大鼠 規(guī)格: 48T/96T
GHRP-Ghrelin 大鼠生長激素釋放肽ghrelin 規(guī)格: 48T/96T
GHRP 大鼠生長激素釋放多肽 規(guī)格: 48T/96T